2025版《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）正式頒布并于2025年10月1日開(kāi)始實(shí)行，對(duì)于25版藥典中高效液相色譜方法參數(shù)調(diào)整允許范圍與20版有更詳細(xì)的要求，為了更好的執(zhí)行法規(guī)，下面我們對(duì)2025版《中國(guó)藥典》色譜參數(shù)允許調(diào)整表中每一項(xiàng)進(jìn)行分析解讀，并進(jìn)行了舉例說(shuō)明，便于我們的理解執(zhí)行。

?? 原文：

不得改變填充劑的理化性質(zhì)如填充材質(zhì)，表面修飾及鍵合相需保持一致。

?? 說(shuō)明：

填充材質(zhì)包含基質(zhì)，比如硅膠基質(zhì)，聚合物基質(zhì)。

?? 原文：

改變色譜柱填充劑粒徑和柱長(zhǎng)后，L/dp值應(yīng)保持不變或在原規(guī)定值的-25%~+50%范圍內(nèi)。

?? 說(shuō)明：

例如：原色譜柱規(guī)格：4.6×250，5 μm。

?? 要求：

分別替換為3 μm和5 μm粒徑，計(jì)算其合規(guī)的柱長(zhǎng)范圍。

?? 計(jì)算如下：

原色譜柱的L/dp值為：250/5=50

則可更換成L/dp為：50×0.75~50×1.5=37.5~75

?? 原文：

在滿足等度或梯度洗脫要求[如為等度洗脫，當(dāng)理論板數(shù)(n)在原色譜柱的-25%~+50%范圍內(nèi);如為梯度洗脫，當(dāng)所有色譜峰(t_R/W_h/2)²值在原色譜柱的-25%~+50%范圍內(nèi)]時(shí)可以調(diào)整，且可使用L和dp的其他組合。前提是應(yīng)滿足系統(tǒng)適用性要求，且已知成分的選擇性和出峰順序不變。

?? 說(shuō)明：

例如：原色譜柱規(guī)格：4.6×250mm，5μm等度條件和梯度條件下理論塔板數(shù)是20000。

?? 要求：

分別替換為2.7μm粒徑，計(jì)算其在等度和梯度下合規(guī)的柱長(zhǎng)范圍。

?? 原文：

在填料粒徑和/或柱長(zhǎng)沒(méi)有變化的情況下，可以調(diào)整柱內(nèi)徑。為避免柱內(nèi)徑減小可能引起的柱外譜帶展寬，應(yīng)減小儀器連接死體積、進(jìn)樣量或檢測(cè)池的體積，適當(dāng)增加采集速率。

?? 說(shuō)明：

建議柱內(nèi)徑≤2.1mm關(guān)注設(shè)備死體積，包含樣品流經(jīng)的全部管路，內(nèi)徑使用≤0.12mm和長(zhǎng)度盡可能的短，檢測(cè)器使用半微量流通池，工作站采集頻率根據(jù)峰寬進(jìn)行調(diào)整，如果出現(xiàn)譜圖出峰早的峰形異常（拖尾，前沿，峰分叉等）出峰晚的峰形越來(lái)越對(duì)稱，可以判斷為是柱外死體積太大導(dǎo)致，進(jìn)行設(shè)備的優(yōu)化。

?? 原文：

等度洗脫時(shí)，在柱尺寸未改變時(shí)，允許流速調(diào)整士50%。當(dāng)柱內(nèi)徑和粒徑改變時(shí)，按下式計(jì)算并調(diào)整流速：

柱尺寸的變化作上述調(diào)整后，允許流速額外變化±50%，梯度洗脫時(shí)，當(dāng)柱內(nèi)徑和粒徑改變時(shí)，按下式計(jì)算并調(diào)整流速。

?? 說(shuō)明：

該參數(shù)調(diào)整與粒徑不相關(guān)，如果條件中沒(méi)有規(guī)定流速，可以根據(jù)項(xiàng)目情況選擇合適的流速，如：內(nèi)徑4.6mm柱使用1ml/min；4mm柱使用0.8ml/min，如果標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了流速則流速的調(diào)整需按以下要求來(lái)調(diào)：原色譜柱使用4.6×250mm ,5μm 流速是1ml/min，分別計(jì)算

1、柱子不改變時(shí)的流速范圍；

2、等度條件下色譜柱更換成3×250mm ,3μm時(shí)的流速在多少；

3、梯度條件下色譜柱更換成3×250mm,3μm時(shí)的流速在多少。

根據(jù)公式分別帶入新色譜柱的內(nèi)徑和粒徑得如下：

?? 原文：

即便色譜柱尺寸沒(méi)有調(diào)整，也可調(diào)整進(jìn)樣體積以滿足系統(tǒng)適用性的要求，上述體積調(diào)整公式可能不適用于表面多孔(SPP)柱替代全多孔(TPP)柱。

?? 說(shuō)明：

該參數(shù)調(diào)整與粒徑不相關(guān)，色譜柱規(guī)格未調(diào)整時(shí)也可以調(diào)整進(jìn)樣體積，但沒(méi)有給出范圍，前提是滿足系統(tǒng)適用性要求，同時(shí)不能因?yàn)檫M(jìn)樣體積改變而導(dǎo)致低響應(yīng)物質(zhì)未檢出。

例如：原色譜柱使用4.6×250mm ,5μm 進(jìn)樣體積20μl，更換成色譜柱3.0×150mm ,3μm時(shí)進(jìn)樣體積根據(jù)公式計(jì)算是：5.1μl，方便操作選擇5μl。

?? 原文：

占比小的流動(dòng)相組分比例可在相對(duì)值±30%進(jìn)行調(diào)整，但任何組分比例的變化不能超過(guò)絕對(duì)值±10%。占比小的流動(dòng)相組分是指小于或等于(100/n)%比例的組分，n為流動(dòng)相中含有的組分?jǐn)?shù)。

?? 說(shuō)明：

需要同時(shí)滿足兩個(gè)條件，小比例的相對(duì)值±30%及任何組分比例變化絕對(duì)值的±10%。

例如：甲醇-水 = 70:30的調(diào)整范圍計(jì)算

已知條件：流動(dòng)相組成是甲醇 : 水 = 70 : 30

組分?jǐn)?shù) n=2  100/n=100/2=50% 

占比小的組分：水（30%）

最終允許范圍：

甲醇 : 水 = 61:39 ～ 79:21

?? 原文：

滿足以下條件的情況下，可對(duì)流動(dòng)相的比例和梯度洗脫程序進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整:

(1)滿足系統(tǒng)適用性要求;

(2)出峰順序不變，分離度和靈敏度滿足要求;

(3)流動(dòng)相的組成和梯度洗脫程序應(yīng)使第一個(gè)峰被充分保留，最后一個(gè)峰被wan全洗脫。

各梯度段梯度時(shí)間的調(diào)整詳見(jiàn)后文。

?? 說(shuō)明：

梯度洗脫條件的調(diào)整可分步進(jìn)行:

(1)根據(jù)L/dp調(diào)整柱長(zhǎng)和粒徑;

(2)根據(jù)粒徑大小和柱內(nèi)徑的變化調(diào)整流速;

(3)根據(jù)柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑和流速的變化，調(diào)整每個(gè)梯度段的梯度時(shí)間。藥典中描述相對(duì)“模糊"需要在實(shí)際分析中謹(jǐn)慎對(duì)待并根據(jù)具體情況做適合調(diào)整。

?? 原文：

等度洗脫:除另有規(guī)定外，在原規(guī)定溫度的±10 ℃范圍內(nèi)調(diào)整

梯度洗脫:除另有規(guī)定外，在原規(guī)定溫度的±5 ℃范圍內(nèi)調(diào)整

?? 說(shuō)明：

如果標(biāo)準(zhǔn)中未規(guī)定柱溫，可以根據(jù)我們的操作習(xí)慣硅膠基質(zhì)色譜柱設(shè)定30℃，聚合物基質(zhì)色譜柱根據(jù)應(yīng)用環(huán)境會(huì)稍高，氨基柱測(cè)定糖類設(shè)定40-45℃。

若標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定柱溫為30 ℃，那么等度洗脫可變化范圍為20-40 ℃，梯度洗脫可變化范圍為25-35 ℃。

?? 原文：

原規(guī)定值±10%范圍內(nèi)調(diào)整。

?? 說(shuō)明：

如果方法中的鹽濃度為0.05 mol/L，調(diào)整范圍是0.045 mol/L-0.055 mol/L，調(diào)整時(shí)需關(guān)注更高濃度時(shí)與有機(jī)相是否有溶解性挑戰(zhàn)。

?? 原文：

除另有規(guī)定外，流動(dòng)相中水相pH值在原規(guī)定值±0.2 pH范圍內(nèi)調(diào)整。

?? 說(shuō)明：

如果方法中規(guī)定了pH調(diào)整范圍則按照方法執(zhí)行，反之則使用該規(guī)定，比如：方法中的pH值為2.5，則可以在2.3-2.7的范圍內(nèi)進(jìn)行。

?? 原文：

不允許改變。

?? 說(shuō)明：

檢測(cè)器類型和檢測(cè)波長(zhǎng)均不能做改變。